ITC: Messung

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Achtung: Bevor die teuer synthetisierten Substanzen vermessen werden, lohnt es sich, mit bekannten Systemen zu üben!
z.B. Wasser / Wasser, 2.5 % Methanol / Wasser, CaCl2 / EDTA (in 200 mm Natriumacetatpuffer pH 5.5)

ITC einschalten

• Orangenes Lämpchen sollte leuchten
• rot und grün wäre fehlerhaft.

Das Programm VPViewer starten

Falls zu diesem oder einem späteren Zeitpunkt die Fehlermeldung erscheint, dass der Injektor nicht gefunden wird:
mit dem großen Schraubenzieher (HEX Driver 7/64) in das gekennzeichnete Loch (Reset) oben am Gerät drücken und so den Injektor neu starten. 

Anschließend auf der VPViewer Oberfläche Doppleklick auf Temp(°C) und über System den Menüpunkt Hardware öffnen.
Nach anklicken von Init. RS-232 sollte das Problem behoben sein. (Siehe Screenshots)

• Ein Neustart des Programms führt aber auch zum Ziel!

Temperatur einstellen

• Das Einstellen der Temperatur erfolgt unter Thermostat/Calib
• durch Doppelklick auf Thermostat Control kann auch die Shield Temp manuell verstellt werden (siehe Screenshots).
• Die gewählte Temperatur sollte höher sein als die Außentemperatur, da das Gerät über keine Kühlung verfügt.
• Im Normalfall ist 1°C Differenz zwischen der Jacket und der Shield Temp empfehlenswert.
• Soll bei Temperaturen unter Raumtemperatur gemessen werden, sollte die Shield Temp deutlich geringer als die Jacket Temp eingestellt werden.
• Das Einregeln der Temperatur kann einige Zeit dauern, gemessen werden sollte erst, wenn DT(°C) konstant bei Null steht.

Zellen befüllen

• Mit der Spritze ca. 2 mL aufziehen (das Zellvolumen beträgt 1.8 mL).
• Spritze einführen, bis der Boden berührt wird.
• wieder leicht vom Boden anheben, befüllen bis der Flüssigkeitsspiegel sichtbar wird.
• Spritze leicht bewegen, um Bläschen zu vertreiben.
• Spritze fast komplett herausziehen.
• das von der Kanüle eingenommene Volumen nachspritzen.

• Die Reference Cell wird mit dem Lösungsmittel befüllt.
• vor dem Befüllen mit dem Reference Plug (im Koffer) den kleinen Nubsi auf der Zelle entfernen.
• nach dem Spülen und Befüllen, den Nubsi wieder aufsetzen.
• Die Sample Cell wird für Referenzmessungen nur mit Lösungsmittel, für die tatsächlichen Messungen mit der Ligandenlösung befüllt.

Injektionsspritze befüllen

• Injektionsspritze in eines der im Thermovac vortemperierten Röhrchen tauchen.
• Unter ITC Control den Fillport auf open stellen.
• Die Spritze mit dem Schlauch anbauen, und soviel Volumen aufziehen, bis ein bisschen Lösung in den Schlauch gezogen wurde.
• Auf Close Fillport klicken.
• Den Schlauch wieder abnehmen.
• Durch klicken auf Purge>Refill die Spritze wiederbefüllen.
• diesen Vorgang zweimal wiederholen (kann ein bisschen dauern, ready und busy geben den Status an).

Projekt benennen

Bei ITC Control unter Data File Name wird das Projekt benannt und bei Available Titrant können Kommentare hinzugefügt werden.

Parameter definieren

Bei den Experimental Parameters gilt als Faustregel, dass die Reference Power einen Wert von 10 zugewiesen bekommen sollte. Die Injection Parameters lassen sich auch während der Messung verändern, Update Parameter nicht vergessen!

Baseline Equilibration

• Das Programm beginnt mit der Baseline Equilibration
• sollte diese länger als eine halbe Stunde dauern, kann die Messung abgebrochen werden, dann wird das nix!

Ende der Messung

• Nach dem Ende der Messung die Injektionsspritze entfernen
• durch Klicken auf Purge>Refill entleeren.

Säubern der Sample Cell

• Das Saugflaschen Konglomerat anschließen (also den grünen Stopfen auf die Saugflasche, die Injektionsnadel in die Messzelle, die Schläuche ans Vakuum und an die Injektionsspritze oder direkt in die Spülflüssigkeit)
• Falls durch die Injektionsspritze gespült werden soll, den Fillport öffnen
• Vakuum anlegen und Spülen

Säubern der Reference Cell

• Das Säubern der Reference Cell muss manuell mit der Spritze erledigt werden
• 10-15 Mal durchspülen ist empfehlenswert.

Aufbewahrung der Zellen

• Die Zellen mit Wasser befüllt lassen
• nicht vergessen, den Deckel aufzusetzen.